液相荧光检测器

感谢您关注紫泰科技，我是陶工，这期和大家介绍一下荧光检测器，它是一种化学发光检测，是指激发态分子从激发态回到基态时发光的现象，当激发能是光时，这个过程叫做光致化学发光，当分子吸收一定波长的光从基态转换到激发态，激发态分子转换回到基态，并伴有光辐射出现，如果分子被照射之后发光时间为 10-9 秒到 10-5 秒，这一过程叫做荧光，也就是光灭的比较快，如果分子被照射之后发光时间大于 10-3 秒，这一过程叫做磷光，也就是光灭的比较慢。

这张图展现了荧光检测器光学系统的所有元件，这些元件都装在检测器室中的一个金属盒子里，您打开这个盒子的机会应该不多，最好没事别打开，容易进灰。

首先看一下光源，光源是一个氙灯，此灯以 3 µs 的闪烁频率发出 200 nm 到 900 nm 的连续光谱，如果您打开仪器的上盖，一定小心这个灯特别的烫，即使工作了几分钟也会非常烫。

光栅利用三相无刷直流电机转动，它决定了光落到流通池上的波长范围，光栅表面有许多微小的凹槽，每毫米有 1200 个凹槽，千万不要用手直接接触。

流通池是由固体熔融石英体做成，可承受最大 20 bar 的背压，这个石英的流通池非常脆弱，所以一定后面不要连检测器，也不要用大流速或粘度高的流动相冲洗它。

在流通池后面有一个参比二极管，来测量穿过流通池的激发光，并校正闪光灯的波动和强度造成的漂移。

这个动画我们来研究一下荧光检测器的光路，首先是氙灯发光，在图中以红色表示，这时光有很宽的带宽，到达激发光栅之后，光栅的位置决定了激发光的波长，被选择波长之后的激发光以蓝色表示，照射流通池，透过流通池的激发光到达了参比二极管，流通池的样品被激发光照射后产生荧光，荧光用紫色表示，因为荧光波长和激发光的波长是不一样的，在这里用蓝色和紫色进行区分，经过发射光栅，选择特定波长的发射光通向光电倍增管，产生信号，发射光栅选择的光用绿色表示，代表与前面的光不同。

之前紫外节目我们探讨过，紫外可以形成时间、强度、波长三维的图像，荧光当然也有，这张图是通过将样品注射到流通池中对样品进行扫描，形成激发波长、发射波长和强度的三维图，这里我们可以清晰的判断出最大的发射波长是440 nm，这个化合物特征波长是250 nm、315 nm 或 350 nm，这是一种非常直观方便的判断最佳激发和发射波长的方法，不过要找纯品注射到检测器还是有点麻烦。

另一种优化化合物激发和发射波长的方法，就是一个样品运行两次荧光，分别对每个物质的激发波长和发射波长进行优化，将两者结合就可以得出最优的检测条件，不需要拧管线，不需要配置双检测器，仅仅跑两针样品就能搞定。